產(chǎn)品名稱：GE Ficoll Paque Premium 淋巴細胞分離液        

產(chǎn)品貨號：17-5442-02

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GE中國授權(quán)代理商：重慶市華雅干細胞技術(shù)有限公司

產(chǎn)品名稱：Ficoll Paque Premium,1.077g/mL 淋巴細胞分離液 

產(chǎn)品貨號：17-5442-02

產(chǎn)品說明：

Ficoll-Paque PREMIUM系列有1.073，1.077，1.084 g/ml三種密度可供選擇。

用于通過密度梯度離心從外周血、骨髓和臍帶血中制備不同密度的人單個核細胞

生產(chǎn)過程符合GMP、ISO 13485:2003及美國藥典(USP)標準

無菌即用型

通過檢驗確證，內(nèi)毒素含量很低(＜0.12 EU/ml)

Ficoll-Paque PREMIUM有RSF文件，

Ficoll-Paque PREMIUM改良于Ficoll-Paque PLUS，后者作為一種從骨髓、外周血和臍帶血中高得率分離單個核細胞的無菌密度梯度介質(zhì)已應(yīng)用了三十多年。與Ficoll-Paque PLUS不同的是，F(xiàn)icoll-Paque PREMIUM的生產(chǎn)是在嚴格控制環(huán)境下完成的, 生產(chǎn)條件符合ISO 13485:2003標準，GMP認證和美國藥典的建議，可用于生產(chǎn)細胞治療相關(guān)產(chǎn)品。

產(chǎn)品介紹：

采用推薦的方法分離人外周血獲得的單核細胞懸液具有以下特點：

● 分離所得的細胞中95 ± 5%為單核細胞

● 分離所得的細胞存活細胞率 > 90%

● 可回收原始的血液樣本中60 ± 20%的單核細胞

● 3 ± 2%的粒細胞

● 5 ± 2%的紅細胞

應(yīng)用

Ficoll-Paque PREMIUM

用于從人外周血，骨髓和臍帶血中分離單個核細胞

Ficoll-Paque PREMIUM 1.084

用于分離較高密度的人單核細胞，還可以用于分離小鼠和大鼠的血細胞

Ficoll-Paque PREMIUM 1.073

用于分離較低密度的人單核細胞, 如基質(zhì)細胞或單核細胞

Ficoll-Paque PREMIUM密度為1.077 g/ml，經(jīng)過優(yōu)化用于從人

外周血分離單核細胞，所采用的方法為由Boyum (3) 改進的

簡便快速的離心方法。此介質(zhì)亦可用于從包括骨髓和臍帶血

等組織來源中分離人單核細胞。采用推薦的方法分離人外周

密度梯度離心原理

見圖，以人外周血為例，血液加入Ficoll-Paque密度梯度分離液后離心分層，從上到下分四層：

血漿層

單個核細胞層：淋巴細胞、單核細胞、血小板（骨髓和臍帶血等樣本還有間充質(zhì)干細胞）

Ficoll-Paque分離液層：密度1.077g/mL

紅細胞、粒細胞層

紅細胞和多形核粒細胞比重較大，為1.092左右，而淋巴細胞和單核細胞比重較小，為1.075～1.090。Ficoll-Paque密度1.077g/mL介于兩者之間，并且分離液中的Ficoll PM400是一種高聚糖，能促進紅細胞凝集。

操作步驟

使用前把Ficoll-Paque density gradient media加熱到18°C - 20°C。若樣本量超過3mL，換用直徑更大的離心管，以保證Ficoll-Paque 分離液：2.4 cm，血液樣本：3.0 cm的高度。

樣本制備

使用新鮮血液確保所分離的單個核細胞的活性。樣本也要加熱到18°C - 20°C。

1. 10mL離心管加入2mL抗凝血和等量的平衡鹽溶液。

2. 顛倒或吸管混勻血液和緩沖液。

單個核細胞分離步驟

1. Ficoll-Paque試劑瓶顛倒多次混勻。

注射器法吸取Ficoll-Paque分離液：

見圖，去掉聚丙烯蓋，插入注射器針頭。

吸管法吸取Ficoll-Paque分離液：

去掉聚丙烯蓋，拉起鋁環(huán)，拉開金屬密封，移除銀環(huán)。拿掉橡膠密封，無菌操作吸取需要的Ficoll-Paque分離液。

離心管加入3mLFicoll-Paque分離液。

稀釋過的血液樣本小心鋪到Ficoll-Paque分離液上面。

注意：鋪樣本時小心不要和Ficoll-Paque分離液混合。

離心400g，30-40min。18°C - 20°C。

用無菌吸管吸掉上層血漿和血小板，不要碰到單個核細胞層（圖4，圖5）。

無菌吸管轉(zhuǎn)移單個核細胞層到無菌離心管。

洗滌分離細胞

1. 預估轉(zhuǎn)移的單個核細胞的體積。加入至少3倍體積的平衡鹽溶液（約6mL）。

2. 用吸管輕柔重懸細胞。

3. 離心，400-500g，10-15min，18°C - 20°C。

注意：高速離心會加速單個核細胞的回復。但是，低速離心（60-100g）能去除血小板。

4. 去掉上清。

5. 6-8mL平衡鹽溶液重懸單個核細胞。

6. 離心，400-500g（或60-100g），10min，18°C - 20°C。

7. 去上清。

8. 使用下游所需液體重懸細胞沉淀。

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Corning  25-072-CV    LSM (Lymphocyte Separation Medium)              500mL   

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